目的 前期研究中，项目组从达摩凤蝶细胞系RIRI-PaDe-2中分离培养出单细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6，通过感染野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）发现克隆株RIRI-PaDe-2-C6对病毒敏感性高于原细胞系RIRI-PaDe-2。本研究将对达摩凤蝶单细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6的生物学特性和外源蛋白表达特性进行研究，并与原细胞系RIRI-PaDe-2进行比较，评价其用于外源蛋白表达的可行性。 方法 使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建重组β-半乳糖苷酶杆状病毒（AcMNPV-Gal）和重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒（AcMNPV-SEAP），分别侵染RIRI-PaDe-2和RIRI-PaDe-2-C6。在感染后的24、48、72、96、120、144、168 h检测2种重组蛋白的表达量，并对2个细胞系的形态学、生长曲线、倍增时间及核型进行分析和比较。 结果 表明：RIRI-PaDe-2和RIRI-PaDe-2-C6均可表达β-半乳糖苷酶（β-Gal）和分泌型碱性磷酸酶（SEAP），单细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6对重组β-Gal的表达水平显著高于原细胞系RIRI-PaDe-2（P < 0.05），在接种AcMNPV-Gal后96 h表达量达到最高。RIRI-PaDe-2-C6对重组SEAP的表达水平与RIRI-PaDe-2无显著差异（P>0.05）。显微观察发现，RIRI-PaDe-2-C6的细胞类型全部为梭形，比原细胞系RIRI-PaDe-2的细胞组成更加单一。RIRI-PaDe-2-C6的群体倍增时间为94.94 h，比原细胞系RIRI-PaDe-2的倍增时间（67.42 h）长。核型分析显示，RIRI-PaDe-2-C6的染色体数量呈正态分布，数目为21~82条，与RIRI-PaDe-2的染色体数目分布范围（48~97条）存在显著差异（P < 0.05）。 结论 通过单细胞克隆方法获得的克隆株RIRI-PaDe-2-C6无论在外源蛋白表达以及基础生物学特性方面均有别于原细胞系RIRI-PaDe-2。

目的 验证ACT基因是否适用于文冠果种子发育的相关基因表达分析，并筛选出在文冠果基因表达分析中最稳定的内参基因。 方法 本研究采用了4种数学算法（ΔC_T、BestKeeper、NormFinder、geNorm）评估12个候选内参基因的表达稳定性，并利用在线工具RefFinder综合评价。 结果 在文冠果不同发育时期种子内参基因综合评分排名为PP2A＞Tip41> EF-1α＞18r＞UCE＞β-TUB＞UBQ＞α-TUB＞CYP＞SAM＞ACT＞GADPH；在文冠果不同组织内参基因综合评分排名为PP2A＞Tip41>CYP＞18r＞UBQ＞SAM＞EF-1α＞UCE＞GADPH＞α-TUB＞ACT＞β-TUB。 结论 PP2A和Tip41基因是文冠果基因表达分析最稳定的内参基因。

目的 为探讨根系在轴向拉力和径向折力下的易损部位。 方法 以3~4 a的柠条、沙柳、沙棘和白沙蒿为研究对象，采用TY8000伺服控制材料试验机测定4种植物侧根分支处和相邻直根的抗拉力与抗折力。 结果 表明：在1~4 mm根径范围内，4种植物侧根分支处和相邻直根的抗拉力、抗折力均与直径呈幂函数正相关，抗拉强度、抗折强度均与直径呈幂函数负相关；同径级时，每种植物单根的抗拉强度和抗折强度均表现为侧根分支处小于相邻直根，4种植物侧根分支处和相邻直根的抗拉强度为柠条((23.70±3.97)、(28.02±4.40)MPa) > 沙柳((14.86±1.28)、(20.33±1.76)MPa) > 沙棘((10.60±2.40)、(15.86±3.90)MPa) > 白沙蒿((5.07±1.25)、(8.80±1.74)MPa)，侧根分支处和相邻直根的抗折强度为：柠条((33.66±7.74)、(47.06±4.41)MPa) > 沙柳((17.31±1.91)、(27.54±3.82)MPa) > 沙棘((3.97±1.23)、(8.75±1.70)MPa) > 白沙蒿((2.18±0.39)、(6.15±1.01) MPa)。 结论 无论受轴向拉力还是径向折力，4种植物根系易损部位均为侧根分支处。造成垂直根模型(WWM)和纤维束模型(FBM)预测根系固土能力偏高的补充原因为：(1)模型根系全部计入直根的抗拉力，忽略了侧根分支处，而侧根分支处是根系固土的薄弱点。(2)模型假设所有根系为轴向受拉的杆件。实际根土复合体发生剪切时，根可能承受轴向拉力，也可能承受径向折力。对于抗折强度小于抗拉强度的植物，模型必然高估根的实际固土能力。

采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对5个双翅目昆虫细胞系进行了染色体分析。结果显示: C6 /36染色体众数为6,为二倍体细胞系; SL2染色体众数为8～12,超二倍体细胞系; L-2 /M delta 2-3染色体众数为8～20,超二倍体细胞系; Aedes albopictus Skuse染色体众数为6,为二倍体细胞系;NIH-SaPe-4染色体众数为10条,为二倍体或亚二倍体细胞系。与来源细胞相比,以上5种细胞染色体数目没有发生根本性的改变。

以多糖含量为指标,以碱液浓度、提取温度、提取时间为实验因素和水平,采用正交实验设计,对蚕蛹多糖进行了碱液提取研究。结果表明,碱液提取蚕蛹多糖的最佳实验条件是碱液浓度0. 02 mol·L-1、提取温度80 ℃、提取时间3 h。在此最佳实验条件下所得的蚕蛹多糖粗品中总糖含量为27. 9% ,氨基酸总量为35. 85% ,蛋白含量为38. 1%。免疫活性实验显示,该多糖可以显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率、淋巴细胞转化率及血清溶血素,与对照组相比,差异具有显著性意义,表明蚕蛹碱提粗多糖可以明显增强小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能。

采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对7种鳞翅目昆虫细胞系进行了染色体分析,得出了各种细胞系染色体分析所需要的秋水仙素浓度与处理时间以及低渗浓度和处理时间的范围; 7种鳞翅目细胞系染色体均表现出典型的鳞翅目昆虫传代细胞的核型特征:染色体数目众多,异倍化严重,多为弥散型的着丝粒的短杆状、颗粒状、点状或圆球状。

对2种双翅目昆虫细胞系(黑腹果蝇胚细胞系SL2以及麻蝇胚细胞系NIH-SaPe-4)38个月长期液氮深低温保存效果进行了研究,通过对冻存时间和保护剂对2种细胞系冻后活力、圆度以及恢复时间影响的测定,比较了3种不同配方冻存保护液的效果。结果表明:2种昆虫细胞系冻后活性均随着冻存时间的增长而逐渐降低。长期冻存期中,使用90%胎牛血清(FBS)+10%二甲基亚砜(DMSO)冻存SL2效果较好,NIH-SaPe-4使用10%DMSO即可满足冻存的需要,而无需额外添加高浓度FBS。甘油不适用于这2种昆虫细胞系的长期

采用来源于3个目14种昆虫的离体细胞系对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcNPV (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)和家蚕核型多角体病毒BmNPV (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus)进行敏感性测定。试验结果表明:各昆虫细胞系对两种病毒的敏感性不同,来源于双翅目及直翅目的细胞系均不能被这两种病毒感染;AcNPV可侵染来源于鳞翅目的Sf21、Sf9、HighFive、RIRI-PX及HZ,宿主范围较广;而BmNPV仅能侵染BmN细胞,宿主专一。AcNPV对Sf9细胞的感染率最高,接种病毒10 d后感染率平均达84.0%,而RIRI-PX的AcNPV病毒产量最高,形成的多角体数目为43.9PIBs/感染细胞。接种BmNPV10 d后,BmN的感染率为72.2%,形成的多角体数目为23.1.PIBs/感染细胞。

使用双翅目昆虫黑腹果蝇( Drosophila melanogaster Fallen )胚细胞系L-2/M delta 2-3作为研究材料,制备10个密度试验组(0.81×106~2.88×107 个·mL-1,每组跨度大于2.00×106 个·mL-1),分别在冻后第6、10、14个月对各组细胞冻后活力、回复时间长短、以及生长状况进行观察和比较,研究密度因素对细胞系L-2/M delta 2-3长期冻存效果的影响。结果表明:冻存密度对细胞系L-2/M delta 2-3冻后活力和状态恢复均有显著影响( P7 个·mL-1以上有利于细胞活力的保持与冻后的恢复。

针对目前昆虫细胞库日常维护工作中在数据和资料管理上的不足,使用Microsoft Visual Basic 2005 软件开发工具与Microsoft SQL Server 2005数据库管理系统等工具构建了一套昆虫细胞库管理系统。本系统的主要任务是实现各种实验数据的集中管理,并为使用者提供实用的工具,方便这些数据的采集和处理。其主要功能有:细胞系基本信息的管理、照片管理、文献管理、核型分析、细胞冻存与复苏操作、生长曲线绘制等,具有功能全面、操作简便、直观,实用等特点。采用数据库管理系统大大提高了细胞库的管理水平,为昆虫细胞系库的长期有效管理奠定基础。